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當前位置:首頁技術文章EZ ECL Femto化學發(fā)光液(飛克級)

EZ ECL Femto化學發(fā)光液(飛克級)

更新時間:2018-11-13點擊次數:3047

使用方法

1) 取出印記膜,加入合適的封閉液在溫室下孵育20-60分鐘,同時振蕩,以封閉膜上非特異性蛋白結合位點。

2) 將膜從封閉液中取出,與一抗工作液在溫室孵育1小時,同時振蕩;或在28℃孵育過夜,不振蕩。

3) 將足量的洗滌緩沖液加至膜上,保證緩沖液將膜*覆蓋。振蕩孵育≥5分鐘,更換洗滌緩沖液并重復該步驟4-6次。增加洗滌緩沖液體積,洗滌次數和洗滌時間有助于降低背景信號。

注:1)孵育前,膜在洗滌緩沖液中的短暫淋洗會提高洗滌效率;2)按前文建議的HRP標記二抗稀釋度非常重要的。

4) 將HRP標記的二抗工作液與膜在溫室孵育1小時,同時振蕩。

5) 重復步驟3,以除去未結合的HRP標記二抗。注:膜與HRP標記二抗孵育后必須進行*洗滌。

6) 將A溶液與B液等比例混合,制備成工作液。每cm2膜使用0.01~0.1ml工作液,工作液可以在溫室下穩(wěn)定8小時。

7) 將印記膜在工作液中孵育5分鐘。從工作液中取出印記膜,并置于一個塑料片或清潔的塑料紙(膜)中,用一張吸水紙吸除多余的液體,并從印記和塑料紙之間小心地壓出氣泡。

8) 將包在塑料紙(膜)中的印記膜置于膠片暗盒中,蛋白質面朝上,除適用于膠片曝光的燈(如紅色安全燈)之外,關閉所有的燈。

;1)膠片必須在曝光期間保持干燥;2)確保將多余的底物從膜和塑料紙上*去除;3)在整個膠片處理期間,使用手套。

9) 將X光膠片置于膜的上面。建議次曝光60秒。之后可調整曝光時間以達到結果。化學發(fā)光反應在底物孵育后的前5-30分鐘期間是強烈的。這一反應可以持續(xù)幾個小時,但強度會隨時間下降,如有底物孵育后較長時間后曝光,曝光時間可能需要延長以獲得較強信號。如果使用磷光存儲成像設備(如Bio-Rad的分子成像儀系統(tǒng))或CCD照相機可能需要較長的曝光時間。

    注:膠片與膜之間的任何移動可能在膠片上造成人為的非特異信號。

10)使用合適的顯影劑和定影劑對膠片進行顯影。如果信號強,則縮短曝光時間或將印記膜進行剝離并降低抗體濃度重新檢測。

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